在上一篇中，我们探讨了Western Blot实验中蛋白浓度的四种测定方法。本篇文章将关注在样本制备过程中常见的问题，并提供相应的解决方案，以帮助科研人员顺利完成实验。

问题1：蛋白浓度低

造成蛋白浓度低的原因包括：1. 细胞或组织量不足；2. 样本与裂解液的比例不合适；3. 样本没有得到充分裂解；4. 采用的不合适的蛋白浓度测定方法。

解决方案

1. 增加样本量；2. 根据样本量适当调整裂解液的用量，例如，对于100万细胞或20mg组织，加入100-200μL裂解液；3.确保裂解时间充足，通常应在低温下保持10-30分钟，组织样本可借助物理破碎，细胞样本则需吹打或颠倒混合；4. 选择适合的蛋白浓度测定方法。

问题2：出现透明胶状物

这种现象通常与基因组复合物释放有关。

解决方案

1. 适当超声或使用1mL注射器反复抽吸，可以有效打断基因组DNA，从而消除粘稠感；2. 在加入Loading Buffer并加热变性时，可以稍微延长煮沸时间，确保结合在基因组DNA上的蛋白质彻底释放，并使DNA部分断裂，进而消除粘稠感；3. 在裂解液中加入广谱核酸酶，以促进DNA的降解。

问题3：上清层出现油脂漂浮

这种现象通常是样本富含脂肪所致。

解决方案

1. 裂解后，让样本在低温下静置，便于吸出浮油；2. 如果吸取后仍无法达到预期效果，可以尝试用二氧化硅吸附，以去除多余的油脂。

为确保最佳实验效果，科研人员在进行样本制备时，应充分重视以上各类问题与解决方案。如果您想要了解更多生物医学领域的专业知识，请关注俄罗斯专享会294，为您的科研之路提供更多支持与帮助。